Durch die Optimierung der bewährten DFS-Taq DNA und speziellen Additiven entstand eine DNA Polymerase, die nicht nur frei von bakterieller DNA ist, sondern auch sehr robust gegenüber PCR-Inhibitoren reagiert (Biomolekülen wie Polysacchariden, Fette und Proteine). Gesteigerte Performance des Enzyms sichert überlegene Sensitivität und zuverlässige Amplifikation. Die DNA Polymerase ist besonders für die qPCR geeignet. Sie wird bei Raumtemperatur angesetzt und bleibt bis zu einer Temperatur von ca. 70°C inaktiv. Die volle Aktivität erreicht die Polymerase ab dieser Temperatur.
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Features:
Durch die Optimierung der bewährten DFS-Taq DNA und speziellen Additiven entstand eine DNA Polymerase, die nicht nur frei von
bakterieller DNA ist, sondern auch sehr robust gegenüber PCR-Inhibitoren reagiert (Biomolekülen wie Polysacchariden, Fette und Proteine). Gesteigerte Performance des Enzyms sichert überlegene
Sensitivität und zuverlässige Amplifikation. Die DNA Polymerase ist besonders für die qPCR geeignet. Sie wird bei Raumtemperatur angesetzt und bleibt bis zu einer Temperatur von ca. 70°C
inaktiv. Die volle Aktivität erreicht die Polymerase ab dieser Temperatur.
Beschreibung:
Die Polymerase repliziert DNA bei 72°C. Sie katalysiert die Polymerisation von Nukleotiden zu Doppelstrang-DNA in 5´-->3´ Richtung und besitzt 5´-->3´ Exonuklease-Aktivität.
Anwendungsbereich:
Anstelle von konventionell gereinigter Taq DNA-Polymerase für sensitive PCR Untersuchungen, Nachweise von Bakterien-DNA oder wenn Biomoleküle die PCR
inhibieren.
Für alle Anwendungen in der "Real-time" PCR geeignet.
Konzentration:
5 units/μl gelöst in 10 mM KPO4 (pH 7.4 bei 25 °C), 0.1 mM EDTA, 0.1%, Tween 20, 0.1 % Triton X-100 und 50 % (v/v) Glycerin.
Unit-Definition:
Ein Unit ist die Enzymmenge, die bei 74°C in 30 min 10 nmol Desoxyribonukleotide in TCA-fällbares, säureunlösliches Material umwandelt.
Reaktionspuffer (inklusive):
Reaktions-Puffer (10X) ”incomplete” (rotes coding): 160 mM (NH4)2SO4, 670mM TrisHCl pH8,8, 0,1% Tween-20
Reaktions-Puffer (10X) “complete” (schwarzes coding): 160 mM (NH4)2SO4, 670mM TrisHCl pH8,8, 0,1% Tween-20, 25 mM MgCl2
MgCl2 (100 mM; grünes coding)
Transport: mit Kühlakkus oder bei Raumtemperatur
Lagerung: bei -20°C für 24 Monate oder für mehr als 3 Monate bei +4°C.
Anwendung:
Verwenden Sie Ihr bisheriges PCR-Standard-Protokoll. Es ist keine Verlängerung der Denaturierungszeit zu beachten.
- Aktivitäts- und Performace-Tests
- Frei von Endo- und Exonukleasen
- Chargenstabilitätstests
Komponenten | Volumen pro Reaktion |
10X Reaktionspuffer | 5 µl |
100 mM MgCl2 | optional |
dNTP-MIx (40mM) | 1,0 µl |
Up-stream Primer (10µM stock) |
0.5-2,5 µl |
Down-stream Primer (10µM stock) | 0.5-2,5 µl |
Template DNA |
0.1-15 ng/ml Plasmid DNA 1-10 µg/ml genomische DNA |
Maximo Superhot Taq DNA Pol (5u/µl) |
0.2 - 1.0 µl |
Sterile dest. Water (PCR-Grade) | bis 50 µl Reaktionsvolumen |
Hinweis:
- Alle Komponenten vor dem Ansatz vortexen
- Reaktionsgemisch bei Raumtemperatur ansetzen
- Das Enzym nach der Template-DNA zusetzen
- Möglicherweise ist es erforderlich die MgCl2 Konzentration zu optimieren
Standard-PCR-Protokoll:
Schritt | Zeit | Temperatur |
Erste Denaturierung | 2-5 min | 94-95°C |
25-30 Zyklen: Denaturierung Annealing Extension |
10-25 sec 10-25sec 60 sec
|
94-95°C 55-65°C 72°C pro 1kb |
Schluss-Extension |
5 min
|
72°C
|
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