Pfu/Psp DNA Polymerase

Features/Beschreibung:

Pfu/Psp-DNA-Polymerase ist eine hochprozessive 5'→3'- DNA-Polymerase mit einer zusätzlichen 3'→5'-Exonuklease-Aktivität (proofreading). Eine 5'→3'-Exonuklease-Aktivität ist nicht vorhanden. Pfu/Psp-DNA-Polymerase ist besonders hoch aufgereinigt. Im Vergleich zu anderen Polymerasen ist das Enzyme thermostabiler und hat eine ca. 10-fach höhere Genauigkeit gegenüber der Taq DNA Polymerase. Die PCR Produkte sind "blunt-end".

Anwendungen:

- "blunt end" PCR Klonierung

- "High-fidelity" PCR

- Primer-Extensions Reaktionen

Konzentration: 5 u/µl

Einheitendefinition:

Eine Unit ist die Enzymmenge, die benötigt wird, um 10 nmol dNTP in 30 min bei 72 °C in säureunlösliche Substanz zu überführen.

Lagerpuffer:

50 mM Tris-HCl, pH 8.2, 0.1 mM EDTA, 0.1% Tween 20, 0.1% Nonident P40, 1 mM DTT, 50% Glyzerin

10 X Reaktionspuffer:

100 mM KCl, 160 mM (NH4)2SO4, 20 mM MgSO4, 200 mM Tris-HCl, pH8.8, 1% Triton X-100, 1 mg/ml BSA

Lagerung: bei -20°C für 24 Monate

Transport: mit Kühlakkus

Qualitätstests für Pfu:

- Frei von Endonukleasen

- PCR Tests mit Lambda DNA und humaner Plazenta DNA

- Reinheit: SDS-Page > 90 %

Hinweis:

- Alle Komponenten vor dem Ansatz vortexen

- Reaktionsgemisch auf Eis ansetzen

- Das Enzym nach der Template-DNA zusetzen

- Möglicherweise ist es erforderlich die MgSO4 zu optimieren

Allgemeines Cycler-Protokoll:

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