Features:

Verringerung der Kontaminationsgefahr und Pipettierfehler durch den fertigen Mix. Verbesserung der Reproduzierbarkeit, da alle Komponenten (Polymerase, dNTP's und Reaktionspuffer bereits in einen optimierten Mastermix vorliegen.

Pfu/Psp-DNA-Polymerase ist eine hochprozessive 5'→3'- DNA-Polymerase mit einer zusätzlichen 3'→5'-Exonuklease-Aktivität (proofreading). Eine 5'→3'-Exonuklease-Aktivität ist nicht vorhanden. Pfu/Psp-DNA-Polymerase ist besonders hoch aufgereinigt. Im Vergleich zu anderen Polymerasen ist das Enzyme thermostabiler und hat eine ca. 10-fach höhere Genauigkeit gegenüber der Taq DNA Polymerase. Die PCR Produkte sind "blunt-end".

Anwendungen:

- "blunt end" PCR Klonierung

- "High-fidelity" PCR

- Primer-Extension Reaktion

Konzentration: 2X konzentriert

Einheitendefinition:

Eine Unit ist die Enzymmenge, die benötigt wird, um 10 nmol dNTP in 30 min bei 75 °C in säureunlösliche Substanz zu überführen.

Komponenten:

Pfu rekombinant, 0,120 mM KCl, 32 mM (NH4)2SO4, 4 mM MgSO4, dNTPs, 40 mM Tris-HCl, pH8.8, 0.2% Triton X-100, 0.2 mg/ml BSA,

Unit definition:

One unit is defined as the amount of enzyme required to catalyze the incorporationof 10 nM of dNTPs into acid insoluble material in 30 minutes at 75°C.

Lagerung: bei -20°C für 24 Monate

Transport: mit Kühlakkus

Qualitätstests:

- DNA Amplifikation bis 2,2 kb Lambda DNA

- Verunreinigung mit bakterieller DNA, frei von Endonukleasen

- Reinheit SDS-Page > 90 %

Hinweis:

- Alle Komponenten vor dem Ansatz vortexen

- Reaktionsgemisch auf Eis ansetzen

- Das Enzym nach der Template-DNA zusetzen

Allgemeines Cycler-Protokoll:

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