Features:
Maximo m-Superhot Taq DNA Polymerase ist besonders für die qPCR geeignet. Sie wird bei Raumtemperatur angesetzt und bleibt bis zu einer Temperatur von ca. 70°C inaktiv. Die volle Aktivität erreicht die Hot Start Taq ab dieser Temperatur. Im Gegensatz zu chemisch modifizierten Polymerasen ist kein verlängerter Denaturierungsschritt nötig.
Anwendungen:
- "Hot Start" und "real time" PCR
- Multiplex PCR
- getestet auch für diagnostische Zwecke
- Amplifikation von komplexer genomischer DNA und cDNA Templates
- Inaktiv bei Raumtemperatur - keine unspezifische Amplifikationsprodukte
- PCR, bei der kurze Aktivierungszeiten gefordert werden
- gesteigerte Sensitivität
Beschreibung:
SuperHot Taq DNA-Polymerase ist ein temperaturstabiles Enzym mit einem Molekulargewicht von ca. 94 kDa, aus dem Eubakterium Thermus aquaticus. Das unmodifizierte Enzym erreicht seine höchste Prozessivität bei 70°C. Es katalysiert die Polymerisierung von Nukleotiden in Duplex-DNA in der 5' → 3'-Richtung in Anwesenheit von Magnesiumionen. Durch Zusätze ist die Aktivität der Polymerase bei Raumtemperatur unterdrückt. Die Polymerase wird erst ab 70°C aktiv.
Konzentration: 5 u/µl
Einheitenbestimmung:
Ein Unit ist die Enzymmenge, die benötigt wird, um 10 nmol dNTP in 30 min bei 74°C in säureunlösliche Substanz zu überführen.
Lagerpuffer:
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT, 50 % Glyzerin, 0.5 % Nonident P-40, 0.5 % Tween-20
Reaktionspuffer (inklusive):
Reaktions-Puffer (10X) ”incomplete” (rotes codeing): 160 mM (NH4)2SO4, 670mM TrisHCl pH8,8, 0,1% Tween-20
Reaktions-Puffer (10X) “complete” (gelbes codeing): 160 mM (NH4)2SO4, 670mM TrisHCl pH8,8, 0,1% Tween-20, 25 mM MgCl2
MgCl2 (100 mM; grünes codeing)
Qualitätstests:
- Aktivitäts- und Performace-Tests
- Frei von Endo- und Exonukleasen
- Chargenstabilitätstests
Transport: mit Kühlakkus oder bei Raumtemperatur
Lagerung: bei -20°C für 24 Monate oder für mehr als 3 Monate bei +4°C.
Anwendung:
Verwenden Sie Ihr bisheriges PCR-Standard-Protokoll. Es ist keine Verlängerung der Denaturierungszeit zu beachten.
Quality control:
Activity and performance test in real time PCR, SDS-PAGE purity, absence of endonucleases/nickases and
exonucleases test
Komponenten | Volumen pro Reaktion |
10X Reaktionspuffer | 5 µl |
100 mM MgCl2 | optional |
dNTP-MIx (40mM) | 1,0 µl |
Up-stream Primer (10µM stock) |
0.5-2,5 µl |
Down-stream Primer (10µM stock) | 0.5-2,5 µl |
Template DNA |
0.1-15 ng/mlPlasmid DNA 1-10 µg/ml genomische DNA |
Maximo Superhot Taq DNA Pol (5u/µl) |
0.2 - 1.0 µl |
Sterile dest. Water (PCR-Grade) | bis 50 µl Reaktionsvolumen |
Hinweis:
- Alle Komponenten vor dem Ansatz vortexen
- Reaktionsgemisch bei Raumtemperatur ansetzen
- Das Enzym nach der Template-DNA zusetzen
- Möglicherweise ist es erforderlich die MgCl2 Konzentration zu optimieren
Standard-PCR-Protokoll:
Schritt | Zeit | Temperatur |
Erste Denaturierung | 2-5 min | 94-95°C |
25-30 Zyklen: Denaturierung Annealing Extension |
10-25 sec 10-25sec 60 sec
|
94-95°C 55-65°C 72°C pro 1kb |
Schluss-Extension |
5 min
|
72°C
|
Maximo m-Superhot Taq DNA Polymerase ist besonders für die qPCR geeignet. Inhibiert mit monoklonalen Antikörpern.
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